凤梨组培外植体的选择有哪些方式?
植物组织培养技术只要包括哪些环节?各环节的主要工作内容是什么?
专业一点1、外植体选取
就是选择组培材料。
可以是根、茎、叶、花、果、胚乳、花粉等等。
主要工作是选取生物活性高的易成活的易分化的部位做为试验材料。
2、无菌体系建立
就是把外界采来的材料经过消毒接种到合适的培养基上。
主要工作是选取外植体消毒方式,培养基类型,激素配比。
3、继代培养
就是把长成的无菌苗接到新的培养基上,继续培养(继代)或者扩大培养(扩繁)。
主要工作是选取合适的培养周期,接种方式,激素配比。
4、生根培养
就是通过激素调节让先前继代培养的无菌苗长出根系。
主要工作是调节激素配比,让长出的根系粗壮有力,有助于提高下一步移栽的成活率。
5、移栽
就是把生根的无菌苗通过一定时间来适应外界有菌环境(复壮)然后移栽到室外的有菌环境中。
主要工作是选取合适的环境条件来壮苗,选取合适的壮苗时间,选取合适的移栽基质,选取合适的基质消毒方式,选取合适的室外培养环境条件。
纯个人手写,纯多年经验,希望能帮到您。
接种:把试验材料放于培养基
培养:光照培养箱或组培室,调节光、温、湿
继代:保存材料或扩繁材料
生根:生根以便于移栽
MA培养基配方是什么?这种培养基主要用来组培哪些外植体?
http://algae.ihb.ac.cn/search/data/MA%20medium.htm#MA medium.htm#
查询各种培养基的地址,可以到“中国淡水藻种库”。该网属于中国科学院水生生物研究所办。
楼主作组培,还是建议你根据不同的外植体,选择不同的培养基,有些培养基成分需要修改才能为你所用。总之,找到一个适合的培养基既需要前人的经验,更需要自己的尝试。
玫瑰组织培养的方法有哪些
2.1外植体选取从生长在田间或盆32313133353236313431303231363533e78988e69d8331333365636566栽的优良品种植株上,选取生长健壮、无病虫害的当年生枝条的茎尖和幼茎。取材最好在晴天正午,并且取用植株上部的幼茎。阴雨天或靠近地面的幼茎,表面污染较为严重,难于消毒。玫瑰除用茎尖和幼茎做外植体外,也可以用叶片、叶柄、根、茎、原生质体、胚、花药、子房、花萼和花托做外植体[7]。
2.2消毒灭菌及无菌苗的建立取玫瑰外植体,用5%~10%的次氯酸钠浸泡10~30min或用01%~02%的HgCl浸泡5~15min。用无菌水清洗7~10次后接种。也可先用75%的酒精浸泡20~30s再采用上述方法消毒。消毒灭菌完毕后,将幼茎切割成05~10cm长的至少带有一个节的切段,接种于培养基中[6]。
2.3愈伤组织的诱导Hill(1967)最早报道从杂交茶香月季(hybridtearose)的茎上诱导了愈伤组织,该实验证明在培养基中添加2,4-D或添加NAA和激动素KT均能很快诱导出愈伤组织。随后不同实验以不同品种为试验材料,从叶、叶柄、根、茎、原生质体、合子胚、花药、子房、花瓣、花萼、和花托成功地诱导了愈伤组织。[7]
2.3.1愈伤组织的成功诱导与品种的基因型有关?摇Lloyd等(1988)曾研究Roseprsica与xanthina,hybrida,Clarissa,Rcabrosa的愈伤发生能力,发现只有Rosepersica与xanthina在MS基本培养基上,添加低浓度的BAP和NAA时,节间能产生愈伤,愈伤组织脆弱,呈淡黄绿色。Kunitake等(1993)研究了RoserugosaThunb,Rosemultiflora,Roseallbacv,SemiplenaRosehybridacv,DuplesRoseharisonii,Rosespinosissi的未成熟种子的愈伤发生能力,发现只有RoserugosaThurb能产生愈伤组织,品种Rontl和Soraya比品种Baccara和Mercedes更易产生愈伤(Kintzios等,1999)。[7]
2.3.2外植体类型?摇Aren等(1993)详细地调查了RosehybridacvMeirutral不同外植体的愈伤诱导率,发现不同外植体愈伤产生的能力不同,叶为90%,根为70%,节间为55%,花药为19%。
2.3.3激素激素也是影响愈伤生成的重要因素,Rout等(1991)以Landora为材料,在添加BA和NAA,2,4-D的MS的培养基上,外植体在接种的7~12d后,在近轴面的叶柄和中脉处产生愈伤,愈伤组织诱导频率高达92%。在接种后15~20d,外植体茎切端处产生愈伤,诱导率为76%。生长素种类和浓度对愈伤产生能力的影响同样很大。早期实验多采用NAA结合BAP或BA等,近年来多采用2,4—D,并证明2,4—D是诱导愈伤的必要因素(Kintzios等,1999;Rout等,1996;vanderSalm等,1996;Vises—suwan等,1997)。进一步研究发现2,4-D对愈伤的诱导效果依赖于月季的基因型,如2,4—D浓度从113umol/L增加到181umol/L降低了Rosehybrida栽培种“Care-freeBeauty”的愈伤诱导频率,但该浓度则对另一个品种“GrandGala”无影响。对于“RedSunblaze”而言,当浓度从113umol/L增加到452umol/L,则表现出愈伤的诱导率提高了,随后当2,4—D再增加,则显著地降低愈伤的诱导频率。愈伤组织在诱导愈伤组织的培养基上能得到很好继代培养(subculture、Li等,2002)。VanderSalm等(1996)证明2,4—D对诱导Rosepersica与xanthina和Moneyway产生愈伤是日夏养花网非常必要的,进一步添加低浓度的BA有正效应,但如BA浓度过高,则产生抑制作用。与以上实验结果不同,Kintzios等(1999)则发现2,4—D对愈伤诱导有负影响作用,可能因为采用的外植体是成熟的叶片。
2.3.4合子胚的发育时期对愈伤的形成能力也有影响?摇如处于心形胚的合子胚,其愈伤诱导率只有2%,子叶胚时的合子胚愈伤诱导率达到85%。[7]
2.4不定芽的诱导月季的常规繁殖方式主要靠扦插、嫁接和压条等,繁殖系数低,远远满足不了生产的需要。80年代初,采取组织培养方法快速繁殖月季苗,用侧芽、顶芽、并诱导生根。第一报道月季不定芽形成见Elliott(1970),他在聚花月季(Rosemultiflora)上成功地诱导了不定芽的形成,并诱导幼苗生根。Zieslin和Halevy(1976)报道细胞分裂素有利于提高不定芽的数量,但也诱导花www.rixia.cc器官败育或退化的频率。不定芽的诱导与供试材料的基因型有关,同时还与外植体的取材部位有关,来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快(Bressan等http://www.rixia.cc,1982)。培养基中添加蔗糖有增加丛芽数量的作用(Langford和wainwright,1987);加入低浓度的GA能进一步改善芽繁殖,95%的外植体能产生7个以上的不定芽(Rout等1990)。能提高芽繁殖数量的物质还有月桂酸甲酯(Voyiatzi等,1995)、乙烯(Kevers等,1992)等。诱导不定芽的培养基为MS培养基添加低浓度的激素BAP03~05mg/L,NAA0004~03mg/L或IAA或GA00~20mg/L。[7]Martin等(1981)调查了2125个玫瑰侧芽做外植体获得的无菌苗三年间在大田生长的情况,没有发现变异植株,这说明侧芽方式繁殖的玫瑰植株性状很稳定。
2.5增殖培养玫瑰的增殖培养,一靠无菌苗切段繁殖,二靠诱导不定芽,形成从生苗;三靠愈伤组织形成体细胞胚或原球胚。将已长大的月季嫩茎切成带1~2个节的茎段,投入新鲜的增殖培养基上,5~6周进行一次继代增殖,增殖系数平均达4~6。在外植到培养10~15d内第一叶的叶原基伸长,第二叶片叶原基可见;15~20d侧芽伸长;25~30d长度达6~10mm,继代增殖会按几何级数增长起来。[5]增殖培养基可用不定芽诱导培养基,如MS+BA03~05+NAA0004~03mg/L。
2.6壮苗与生根壮苗培养的培养基为:MS+BA03~05+NAA001~01或MS+BA03~05+IBA03。[4]也可以壮苗为主,增殖为辅,使增殖与壮苗合二为一。玫瑰组培苗增殖与壮苗需光照10~12h,光照强度2000lx,温度24~26℃。[4]
玫瑰在组培过程中,其生根能力因品种特性、所用植物材料及培养基成分而有较大差异,许多研究结果表明,玫瑰茎段微繁殖容易生根,使用植物激素IAA,IBA或NAA含量01~05mg/L,蔗糖含量2%~25%的MS培养基有利于玫瑰茎段生根。另外,光照、温度等对玫瑰微繁殖生根也有直接影响,Bressan等(1982)研究指出,光照时间每天12h以上,光照强度适宜则有利于生根。一般情况下,玫瑰茎段组织培养8~10d内则可生根。[6]加入适量的活性炭有利于玫瑰生根。
2.7炼苗与大田移栽炼苗和大田移植是玫瑰微繁殖获得成功的最后阶段。[6]组培幼苗由人为培养环境转移到天然生长环境中,环境条件发生巨大变化,湿度大幅度降低,温度不恒定,光照强烈,微生物多,故需炼苗过渡。一般玫瑰微繁殖炼苗需经过室内三天的取盖炼苗,然后将苗从瓶中取出,洗去根部培养基,定植在珍珠岩、泥炭、蛭石或沙土中,用3~5%的多菌灵喷洗。炼苗时要注意基质中的水分含量,水分太少,不能满足苗生长发育;水分太多,导致烂苗。炼苗中、后期要注意通气,给予足够的光照,其幼苗成活率可达80%以上。
蜻蜓凤梨的吸芽的组织培养方法步骤有哪些?
蜻蜓凤梨“水槽”宽阔,贮水100~200mL,易生菌类和藻类,顶芽消毒困难。但其短缩茎粗大,新生吸芽也较粗壮。因此,可以取其吸芽或短缩茎进行组织培养。
①无菌材料获得。取高度10cm以上尚未贮水的吸芽,剥除基部棕色硬质鞘叶后,切掉基部带黑色日夏养花网维管束的部分,并切到顶部的叶片,保留2~3cm的长度,直接在超净工作台上操作:用锋利的刀片逐层切掉剩余的叶片至叶片紧密包裹的部位,然后从基部切掉剩余叶片,用0.1%HgCl2水溶液振荡消毒15min(加2滴吐温),无菌水冲洗5~6次后,用无菌纸吸干水分,在超净台上吹干。
图27蜻蜓凤梨侧芽外植体的剥取
取消毒好的外植体,切去基部被HgCl2水溶液接触到的伤口部分,再逐层切去各层接触HgCl2水溶液的部分及顶部的叶片,保留1~2mm叶片或直接去掉顶部叶片和茎尖,将剩余的茎纵切4~8块,小切块基部向下竖直接种到培养基。
②不定芽诱导。不定芽诱导培养基:MS+6-BA1.0~2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶5.8g/L,pH5.8~6.0。培养温度25~29℃,暗培养1周后,光照培养。光照时间10~12h/d,光照度20~30mol/(m2穝)。
20d后,接种外植体叶腋处的侧芽开始膨大,后逐渐形成丛生芽。
③不定芽增殖。不定芽增殖培养基:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶5.8g/L,pH5.8~6.0。培养温度25~29℃,光照时间10~12h/d,光照度30~40mol/(m2穝)。
不定芽增殖过程中也会产生瘤状的愈伤组织,继代后发育成不定芽。切除抽生过高的不定芽叶片,将丛生芽切分成小块,接种到继代培养基上,光照培养,每隔30~40d继代1次,增殖系数在4.0以上。
④壮苗培养。壮苗培养基:MS+蔗糖30g/L+卡拉胶5.8g/L,pH5.8~6.0。培养温度25~29℃,光照时间12~15h/d,光照度30~40mol/(m2穝)。
把产生的丛生不定芽分成单株或切割成小块后接种于培养基中。每瓶接种10~15株或丛生芽4~5块。
⑤生根培养。生根培养基:MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶5.8g/L,pH5.8~6.0。培养温度25~29℃,光照时间15~20h/d,光照度40mol/(m2穝)。
当继代增殖的丛生芽长高到3~4cm时,将丛生芽分成单株,接种到生根培养基上,每瓶10~15株。光照培养15d后,生根率达100%。生根苗叶片浓绿,植株粗壮。可置于荫棚(70%~80%遮阴度)内炼苗,5~7d后可进行移栽。
⑥移栽。移栽时,用清水将黏附在根上的培养基洗净,用0.2%~0.3%多菌灵水溶液浸泡10~15min,移栽到基质中,淋水定根。基质宜选疏松肥沃的表土并配以过筛的河沙及少量发酵过的椰糠为宜,并用土壤消毒剂消毒。移栽密度为每平方米100~120株。移栽后遮阴保湿10~15d,然后逐渐去掉保湿遮阴物。移栽成活后,当新叶抽出3~4片时,种苗已经较为拥挤,此时需要将种苗移植到苗钵(直径8cm,高12cm),进行成品苗的培养。
蜻蜓凤梨不定芽增殖及移栽培养
A.不定芽增http://www.rixia.cc殖B.移栽后2个月的组培苗。
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