花卉组织培养的培养基要怎样配制?
花卉组织培养需要哪些设施和设备?
组织培养已经在花卉的育苗上得到了广泛的应用,如大花蕙兰、蝴蝶兰、非洲菊、凤梨类、花烛类等主要用组织培养育苗,脱毒、复壮也用组织培养育苗。组织培养也叫微体繁殖,是根据植物细胞全能性的原理,在无菌的条件下,将离体的植物器官、组织、细胞、原生质等在适宜的培养基上培养,促其分裂分化,变成幼苗和成苗的技术。
(1)化学实验室。一般需15~20米2的房间。室内有供仪器洗涤、晾干、配制药剂和培养基的设备;有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管等玻璃器皿;有精确度0.1克天平用来称量蔗糖、琼脂。精确度1毫克天平用来称量大量元素、精确度0.1毫克的分析天平用来称量微量元素和激素。至少有精确度0.1克和0.1毫克两种。备有所用的各种无机盐、维生素、氨基酸、糖类、琼脂、生长调节剂等。还要有冰箱、烘箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅等。
(2)接种室。由两间连在一起的房间组成,其中一间作准备室,另一间作接种室,都要有照明灯和紫外灯。接种室内摆放操作台,放置酒精灯、接种工具、试管、三角瓶等。有条件的最好用超净工作台,并将超净工作台放在无菌室内。经济条件差也可用接种箱来接种,但生产量大时用起来不方便,费工。
(3)培养室。用于将接种到试管、三角瓶、罐头瓶等玻璃容器内的微小植物体(外植体)进行培养生长的场所。要有放置玻璃容器的培养架。要有控温设备,能调节和保持恒温的能力。要有照明和调节光照度的能力,并设有定时器加以自动控制。
蝴蝶兰组织培养的培养基配制
一般的兰花组织培养都选取MS、½MS、改良Knudson C、B5等培养基,根据你培养的品种及其适应条件可以对培养基物质进行调整。
现在有很多种配方都可以做的了,还是要看比较以及好坏,不过这在商业上都是处于保秘阶段
我是一个中学生,想做组织培养,请问组织培养用的培养基怎么配制?
要从最简单的入手,讲得详细一点,尽快回答!!!培养基的灭菌要求挺高的,需要115℃灭菌15min
而且实验要求是无菌环境或者是净化工作台、生物安全柜等百级层流区,一般中学都没有这种设备。。。所以有点困难
而且实验要求是无菌环境或者是净化工作台、生物安全柜等百级层流区,一般中学都没有这种设备。。。所以有点困难
是微生物培养吧,也就是针对细菌的培养,难不成你还想养细胞?
这个可有点难……得设备无菌操作台……没有只能酒精灯口无菌空间,几率小的很,我们在无菌操作台也有好多染菌……再就你培养基也不是专业灭菌的话……
不会
培养基母液配制的方法如何
配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类、不同的外植体、不同的培养阶段应当有所不同。一般来说,各种培养基都有大量元素、微量元素、维生素、激素、糖和琼脂等物质,有时还要在培养基里添加有机附加物,如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生产上,首先选用已有的培养基配方,它是前人研究的成果,又是经过生产实践验证的。现在几乎各种花卉用的营养基配方都有,可以免去您再研究的麻烦,当然在生产实践中,也可适当改进。如果您找不到合适的配方,可先试用MS培养基,MS是Murashige和Skoog的缩写,他们二人于1962年研究出来了这种培养基。下面以MS培养基为例,介绍怎样配制。
(1)配制母液。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1 000倍称量后制成一种浓溶液,这种浓溶液叫母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,这样做可节省许多时间。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的,不能放在同一个容器中。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确。
母液①:硫酸镁18.5克,硝酸铵82.5克,硝酸钾95.0克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的50倍,配1升培养基时量取20毫升母液。
母液②:氯化钙22.0克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液③:磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液④:乙二胺四乙酸二钠3.73克,硫酸亚铁2.78克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑤:硼酸620毫克,硫酸锰2230毫克,硫酸锌860毫克,硫酸铜2.5毫克,碘化钾83毫克,钼酸钠25毫克,氯化钴2.5毫克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑥:http://www.rixia.cc肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡哆醇25毫克,盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
(2)配制培养基。配制每1000毫升培养基,称取6~10克琼脂作凝固剂,具体按配方要求称量,放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母液。当母液加完后,根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等,细胞分裂素类0.04~10毫克,细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完后倒入已熔化的琼脂中。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积。继续加温,直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节,多数培养基的pH在5.4~6.0之间,MS培养基的pH为5.7。
将配好的培养基趁热倒入培养容器中,培养基占容器体积的1/3~1/4。不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌感染。然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用。在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制。到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌好的培养基,放在接种室中培养3天,没被感染后才能用来组织培养。
(1)配制母液。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1 000倍称量后制成一种浓溶液,这种浓溶液叫母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,这样做可节省许多时间。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的,不能放在同一个容器中。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确。
母液①:硫酸镁18.5克,硝酸铵82.5克,硝酸钾95.0克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的50倍,配1升培养基时量取20毫升母液。
母液②:氯化钙22.0克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液③:磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液④:乙二胺四乙酸二钠3.73克,硫酸亚铁2.78克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑤:硼酸620毫克,硫酸锰2230毫克,硫酸锌860毫克,硫酸铜2.5毫克,碘化钾83毫克,钼酸钠25毫克,氯化钴2.5毫克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑥:http://www.rixia.cc肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡哆醇25毫克,盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
(2)配制培养基。配制每1000毫升培养基,称取6~10克琼脂作凝固剂,具体按配方要求称量,放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母液。当母液加完后,根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等,细胞分裂素类0.04~10毫克,细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完后倒入已熔化的琼脂中。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积。继续加温,直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节,多数培养基的pH在5.4~6.0之间,MS培养基的pH为5.7。
将配好的培养基趁热倒入培养容器中,培养基占容器体积的1/3~1/4。不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌感染。然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用。在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制。到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌好的培养基,放在接种室中培养3天,没被感染后才能用来组织培养。
一般配制成百倍浓度的。
譬如CoCl2溶液的培养基浓度是0.006%,那你就配制成0.6%的溶液,配制一升培养基的话取10ml即可。
通常我们的实际情况是同一个培养基需要配制多个母液,我们可以将多个微量元素配制在一起,然后在溶液里加几滴浓硫酸,保证母液的稳定性。
然后母液应该放在冰箱里4℃冷藏。最好是避光,譬如用棕色瓶分装或外裹一层牛皮纸。
使用时则尽量用干净无菌的吸管来移液,或者直接用移液器,枪头一般一次性使用。
譬如CoCl2溶液的培养基浓度是0.006%,那你就配制成0.6%的溶液,配制一升培养基的话取10ml即可。
通常我们的实际情况是同一个培养基需要配制多个母液,我们可以将多个微量元素配制在一起,然后在溶液里加几滴浓硫酸,保证母液的稳定性。
然后母液应该放在冰箱里4℃冷藏。最好是避光,譬如用棕色瓶分装或外裹一层牛皮纸。
使用时则尽量用干净无菌的吸管来移液,或者直接用移液器,枪头一般一次性使用。
矮牵牛花组织培养 培养基的配方.www.rixia.cc
老师喊我网上查,我找不到.矮牵牛(Petuniahybr~ )又名碧冬茄,为茄科多年生草本花卉,早春及初夏开花不断,花团锦簇,颜色丰富多彩,是世界上最普及、销售量最大的花卉之一,有花卉园艺代名词之美称,倍受人们的重视【”。目前,在园艺中大量应用的矮牵牛是一个园艺品种群,于19世纪初在欧洲用一些原产南美的野生种杂交选育而成。发展到今天,大致可分为:巨大花单瓣型、大花单瓣型、大花重瓣型、小花单瓣型和小花重瓣型等类型。其花色变化极其丰富。花径5~14cm。由于是杂交种,矮牵牛结实率低,用种子繁殖,其后代性状易分离退化,扦插繁殖又受材料的限制,所以组织培养是解决繁殖材料供不应求问题最有效的方法。本文将就多年来有关矮牵牛的组织培养技术进行概述。以期对今后矮牵牛的组织培养研究有所裨益。l 外檀体的选择根据植物细胞全能性.理论上任何活组织在适宜的条件下都能发育成完整的植株。但是,不同生长状况、发育阶段、生长环境和不同部位的外植体存在一定的生理生化差异。因此选择不同的外植体可影响组织培养的形态发生。可用作矮牵牛组织培养外植体的有种子、带芽茎段、茎尖、叶片、花蕾、花瓣、花药等。但是,不同品种或不同外植体组培的结果不一样。曲彦婷等翻以重瓣矮牵牛的叶片、茎段、茎尖和花蕾为外植体进行培养,结果认为:培养前期愈伤组织分化差别不大,但是后期茎尖出苗率最高,达90%,茎段次之,叶片有玻璃化现象,而部分花营已经在培养基上开花。佟凤琴等圈以叶片、茎尖、茎段为外植体对矮牵牛进行培养,都成功地获得了再生植株,但是在培养过程中,也是茎尖先分化出芽,其次是茎段,叶片分化出芽的时间最长。权宏等 以叶片为外植体,约20d产生愈伤组织,4周产生幼芽。而瞿素萍翻以茎尖及茎段为外植体。3d后开始形成愈伤组织。10d后就分化形成苗。张树军等同对带芽茎段进行培养,7d后腋芽就开始萌发,1个月左右即可产生嫩茎。纪生疆用以转基因矮牵牛为材料,用茎尖、茎段、叶片为外植体进行组培,结果表明:茎尖产生愈伤组织最多,茎段次之,叶片最少。另外,以种子、花蕾、花药等作外植体均已获得再生植株 一作者简介 赵琛(1975一),男,广东湛江人,农艺师,主要从事作物栽培与组织培养方面的研究。收稿日期 2006-11-20从分化结果来看。茎尖作外植体最好,幼芽分化所需时间短,分化出来的幼芽健壮;其次为茎段,叶片不但产生愈伤组织少,而且产生幼苗所需时间长。在茎尖和茎段试验中,前者无论在生长势或分化率方面都优于后者.虽然二者都含芽原基。但茎尖从形态结构上比茎段更趋于完整。而且营养及激素含量相对较多,具备更强的感受泰I懈。但是。由于矮牵牛分枝少,茎尖数量有限,如果全部以茎尖为外植体,不能提供足够的商品苗。作为外植体的茎段,一般长l~2cm。叶片则取lcm2为宜,虽然用叶片作外植体最终能得到大量幼芽,但是所需时间长,而且得到的幼芽比较弱。综合来看,以茎段(包括茎尖)为外植体是矮牵牛组织培养的最佳选择。2 培养基和培养条件对组培结果的影响2.1 基本培养基的选择培养基是外植体生长的营养来源,植物不同,所需养分就不同。因此。选择合适的培养基对组织培养至关重要。目前.国内外主要采用MS和1/2MS培养基进行矮牵牛组织培养,其中MS主要用来培养愈伤组织及继代增殖,1/2MS主要用于生根培养。也有用NH培养基唧和1/4MS培养基l“1对矮牵牛进行组培的,但是用于其他一些物种中的N6、ZHS、LS等 基本培养基未见用于矮牵牛。针对不同的需要,可以改变基本培养基中的营养成分及其含量。张敏等四在培养愈伤组织继代增殖的基本培养基里加3%的蔗糖.而在生根培养基里加2%的蔗糖。而郭慧杰I1引除了在以MS为基本生根培养基里加2%的蔗糖外。还加了0.25%的活性炭。代色平等唧则在NH培养基的基础上,比较了不同浓度以及不同糖源对花药诱导率的影响,结果表明:麦芽糖比蔗糖的效果好,愈伤组织诱导率高,而且分化能力强,在一定范围内,麦芽糖的浓度对诱导率没有影响。但是相对于蔗糖本身来说,2%的浓度对花药诱导率最高。分析认为:麦芽糖能显著提高胚状体或愈伤组织分化率。可能是由于在麦芽糖培养基中产生的胚状体或愈伤组织较为“年轻”.从而具有更高的再生能力 。2.2 不同激素及其组合对诱导愈伤组织的影响到目前为止.大部分组织培养研究者都用6-BA作为诱导愈伤组织的主要激素,至于使用量以及是否与其他激素配合使用,不同的品种、不同的材料和不同的研究者得到了不同的结论。有人认为培养物愈伤组织的产生与BA的浓度成正比,BA浓度愈高,产生的愈伤组织块愈多,愈伤组9维普资讯 http://www.cqvip.com园艺博览 《现代农业科技)2007年第2期织块愈大。能分割的小块就愈多,繁殖倍数也愈高,但变异率也愈高嘲。大部分研究者用BA或6-BA与NAA组合来诱导愈伤组织的产生.www.rixia.cc而且取得了良好的效果p,71。至于所用浓度,一般BA在1.0~3.2mg/L之间、NAA在0.1 .2mg/L之间都能获得大量的愈伤组织,最常用的是BA 1.0mg/L+NAA O.Img/L。也有用6-BA与IBA组合取得较日夏养花网好效果的嘲。2.3 不同激素及其组合对芽分化厦继代增殖的影响以叶片作为外植体的培养过程要经过愈伤组织的产生然后才出现芽的分化。用带芽茎段或茎尖作外植体则直接进行芽的分化或芽的生长。但是,为了增加繁殖系数都需将分化出来的芽进行继代增殖培养。在进行芽分化培养中,一般采用激素组合,最常用的组合有两种:BA+IBA和6-BA+NAA。也有人采用3种激素组合或单一激素取得较好效果的。比如权宏等H用6-BA0.5mg/L+4一Pu0.5mg/L+NAA0.1mg/L就取得了较好的分化效果;而张树军等旧用细胞分裂素ZT(玉米素)也得到了大量增殖芽。所用激素浓度不同,往往分化效果也不一样.其中BA浓度0.05~2.0mg/L、NAA浓度0.O5 .2mg/L、6-BA浓度1.O~3.0mg/L都有人用过,而且效果不错。张颖等【l71研究认为:高浓度的BA可以直接从茎和叶上诱导出愈伤组织,由愈伤组织形成不定芽苗;中浓度的BA使其形成定芽和不定芽两种苗;低浓度的BA基本为顶芽和侧芽两种定芽成苗。2.4 不同激素及其组合对根分化的影响生根培养基基本上以1/2MS为基本培养基,在此基础上添加NAA是目前最流行的根分化培养基。NAA使用浓度不一,0.03-2.0mg/L都有人使用,对不同的基因型所需浓度不一定相同。郭慧杰啕用美国进口的杂交种垂吊矮牵牛“Wafe”为材料。以MS+N从2.0mg/L+6IBA0.1mg/L为生根培养基。得到生根率为95%。吴林森旧通过比较试验得到1/2MS+NAA 1.0mg/L生根率为100%,而且根系发达,植株生长健壮。大部分研究者认为,NAA和IBA对生根有促进作用,但也有这两种激素对生根有抑止作用的研究结果嗍,原因可能是材料不同或者前期使用激素不同所致。2.5 培养条件目前普遍培养条件为:via值5.8,光照10-12h,温度20N28~C,光照强度1 000"-'2 0001x。3 组培苗移栽技术研究组培苗移栽一般经过www.rixia.cc三个步骤:首先,当根长至lcm以上、苗高约4~5~m时在自然条件下打开瓶口开始炼苗,炼苗时间约2~.3d或7~8d;然后把苗取出,用温水洗干净根部粘附的培养基。移栽至消过毒的无土基质中。适当遮阴并控制环境温度;lON20d后即可移栽大田或上盆。4 展望对矮牵牛进行组织培养的研究已经有很长时间,已经初步建立了快繁体系。为市场幼苗的需求做出了一定贡献,但尚有许多问题值得继续研究。在种质资源保存方面研究不多。许多优良外来品种未作种质保存即生产成商品上市,导致每年都要重复从国外进口。造成资源浪费。很少见有从多倍体培养及转基因育种方面进行组培的应用,这应该是未来矮牵牛新品种培育发展的重要方法之一。对组培苗移栽技术虽然也有一定的研究,但是力度不够。思路单一,方法陈旧,未见有既可缩短组培苗适应期。又可培育出生长健壮的移栽技术出现。建立一个高效、优质、适应全方位需要的矮牵牛组培技术,既是矮牵牛研究者的迫切需要,也是市场的需要。豆科的豌豆、蚕豆和禾本科的黑麦草抗寒、抗旱、抗瘠能力较强,成活率较高,长势较好,产量较高,含氮最也高,分解较快,翻埋后对提高土壤肥力效果较好。当年对茶树生长不但没有太大的矛盾.相反还有促进作用,尤其是豆科的10- -— 卜--—卜 -—卜*-—卜蚕豆和豌豆表现最好,是高山新垦红壤有机茶园较为理想的绿肥品种.有良好的推广前途。
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本文标题: 花卉组织培养的培养基要怎样配制?
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