你问的是对生物材料(外植体)还是培养基器皿等物品的灭菌方法?
对物品多用物理方法:高温蒸汽灭菌\干燥灭菌
但在使用前,往往也会用酒精再擦一遍,然后用火烧一下.
对外植体灭菌:升汞,次氯酸钠等.

我只知道物理方法是高温和用盐来脱掉细菌细胞的水分吧
化学方法不清楚

化学方法:先用酒精,后用升汞处理

我只知道物理方法是高温和用盐来脱掉细菌细胞的水分吧
化学方法不清楚 化学方法:先用酒精,后用升汞处理

1、常用的消毒剂按成分分类主要有9种：含氯消毒剂、过氧化物类消毒剂、醛类消毒剂、醇类消毒剂、含碘消毒剂、酚类消毒剂、环氧乙烷、双胍类消毒剂和季铵盐类消毒剂;按消毒效果分类有3种：高效消毒剂、中效消毒剂、低效消毒剂。当今社会提倡无毒环保，环凯推出了高效环保消毒剂。
2．常用化学消毒灭菌方法
（1）浸泡法
选用杀菌谱广、腐蚀性弱、水溶性消毒剂HqlIGuXZ，将物品浸没于消毒剂内，在标准日夏养花网的浓度和时间内，达到消毒灭菌目的。
（2）擦拭法
选用易溶于水、穿透性强的消毒剂，擦拭物品表面，在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的。
（3）薰蒸法
加热或加入氧化剂，使消毒剂呈气体，在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的。
适用于室内物品及空气消毒或精密贵重仪器和不能蒸、煮、浸泡的物品（血压计、听诊器以及传染病人用过的票证等），均可用此法消毒。
①纯乳酸
常用于手术室和病室空气消毒。每100m2空间用乳酸
12ml加等量水，放入治疗碗内，密闭门窗，加热熏蒸，待蒸发完毕，移去热源，继续封闭2
小时，随后开窗通风换气。
②食醋
5－10ml/m3
加热水
1－2m3
，闭门加热熏蒸到食醋蒸发完为止。因食醋含
5％醋酸可改变细菌酸碱环境而有抑菌作用，对流感、流脑病室的空气可进行消毒。
此外，尚可应用甲醛或过氧乙酸等进行熏蒸灭菌
（4）喷雾法
借助普通喷雾器或气溶胶喷雾器，使消毒剂产生微粒气雾弥散在空间，进行空气和物品表面的消毒。如用
1％漂白粉澄清液或
0.2％过氧乙酸溶液作空气喷雾。对细菌芽胞污染的表面，每立方米喷雾
2％过氧乙酸溶液
8ml
经30分钟（在18℃以上的室温下），可达
99.9%杀灭率。
（5）环氧乙烷气体密闭消毒法
将环氧乙烷气体置于密闭容器内，在标准的浓度、湿度和时间内达到消毒灭菌目的。
环氧乙烷是广谱气体杀菌剂，能杀灭细菌繁殖体及芽胞，以及真菌和病毒等。穿透力强，对大多数物品无损害，消毒后可迅速挥发，特别适用于不耐高热和温热的物品，如精密器械、电子仪器、光学仪器、心肺机、起博器、书籍文件等，均无损害和腐蚀等副作用。本品沸点为10.8
℃,
只能灌装于耐压金属罐或特制安瓿中。

消毒剂的的选择和消毒处理时间长短取决于植物材料对消毒剂的敏感性，越幼嫩或越敏感的植物材料处理时间不宜过长，也不宜采用强消毒剂。一般植物材料首先在消毒前除去泥土或死组织，然后用水冲洗除去外部污染物，然后剥除外层表皮或组织。消毒时可先在70%酒精中浸泡数秒以除去空气气泡，用1.0%次氯酸钠消毒10~30分钟，或或用0.1%升汞消毒5~15分钟，之后用无菌水冲洗3~5次后接种。所用消毒液与外植体体积大致为1比10。有时为了增强消毒效果，可以采取以下一种或几种办法：将植物材料在灭菌前用十分清洁的流水（或自来水）冲洗0.5~2小时，在消毒剂中加入1滴或数滴吐温-20或80（浓度为0.08%~0.12%），在消毒过程中不时搅拌或振荡，在真空中进行消毒，多种消毒剂多次消毒处理或复合消毒处理，采用杀虫剂和杀菌剂进行表面消毒处理或适量地加入培养基

1、酒精
　　酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
　　酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
2、升汞
　　又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
3、次氯酸钠
　　次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
4、漂白粉
　　漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
5、过氧化氢
　　也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
6、新洁尔灭
　　这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。

酒精

用酒精擦洗

1.外植体消毒的时间要根据不同的外植体材料以及选择消毒剂的种类，使用浓度进行设定。

1、外植体的选择
外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同。为保证植物组织培养获得成功，选择合适的外植体是非常重要的。
（1）选择优良的种质及母株
无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。尤其是进行离体快繁，只有选取优良的种质和基因型，离体快繁出来的种苗才有意义，才能转化成商品；生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后容易成功。
（2）选择适当的时期
组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。叶子花的腋芽培养，如果在1月至翌年2月间采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3-8月间采集，萌发的数目多，萌发速度快。
（3）选取适宜的大小
培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。通常情况下，快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2，其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。材料太大，不易彻底消毒，污染率高；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难以成活。
（4）外植体来源要丰富
为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系，往往需要反复实验，并要求实验结果具有可重复性。因此，就需要外植体材料丰富并容易获得。
（5）外植体要易于消毒
在选择外植体时，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率。一般地上组织比地下组织消毒容易，一年生组织比多年生组织消毒容易，幼嫩组织比老龄和受伤组织消毒容易。

2、外植体取材的部位
植物组织培养的材料几乎包括了植物体的各个部位，如茎尖、茎段、花瓣、根、叶、子叶、鳞茎、胚珠和花药等。
（1）茎尖
茎尖不仅生长速度快，繁殖率高，不容易发生变异，而且茎尖培养是获得脱毒苗木的有效途径。因此茎尖是植物组织培养中最常用的外植体。
（2）节间部
大部分果树和花卉等植物，新梢的节间部是组织培养的较好材料。新梢节间部位不仅消毒容易，而且脱分化和再分化能力较强，因此是常用组织培养材料。
（3）叶和叶柄
叶片和叶柄取材容易，新出的叶片杂菌较少，实验操作方便，是植物组织培养中常用的材料。尤其是近年在植物的遗传转化中，以叶片为试验材料的报道很多。
（4）鳞片
水仙、百合、葱、蒜、风信子等鳞茎类植物常以鳞片为材料。
（5）其他
种子、根、块茎、块根、花粉等也可以作为植物组织培养的材料。
但是，不同种类的植物以及同种植物不同的器官对诱导条件的反应是不一致的。如百合科植物风信子、虎眼万年青等比较容易形成再生小植株，而郁金香就比较困难。百合鳞茎的鳞片外层比内层的再生能力强，下段比中、上段再生能力强。选取材料时要对所培养植物各部位的诱导及分化能力进行比较，从中筛选出合适的、最易表达全能性的部位作为为植体。

3、外植体的消毒
植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂
常用的消毒剂如下表所示。理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。

常用消毒剂的使用方法及效果

消毒剂

使用浓度/%

消毒时间/min

去除的难易

消毒效果

对植物毒害

升汞

0.1~0.2

2~10

较难

最好

剧毒

酒精

70~75

0.1~1

易

好

有

次氯酸钠

2

5~30

易

很好

无

漂白精粉

饱和溶液

5~30

易

很好

低毒

过氧化氢

10~12

5~15

最易

好

无

新洁尔灭

0.5

30

易

很好

很小

硝酸银

1

5~30

较难

好

低毒

抗菌素/(mg.L-1)

0.4~5

30~60

中

较好

低毒

①酒精
酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞
又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠
次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉
漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢
也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭
这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。

（2）消毒方法
①茎尖、茎段及叶片等的消毒
消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。对于一些表面不光滑或长有绒毛的材料，可用洗涤剂清洗，必要时用毛刷充分刷洗，硬质材料可用刀刮。
消毒时在超净台上操作，先用70%酒精HqlIGuXZ浸泡10~30s，以无菌水冲洗2~3次，然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用2%次氯酸钠浸泡10~15min或用0.1%升汞浸5~10min。消毒时要不断搅动，使植物材料与消毒剂充分地接触。若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴Tween-20，最后用无菌水冲洗3~5次。
②果实及种子的消毒
先用自来水冲洗10~20min，再用酒精迅速漂洗一下。果实用2%次氯酸钠浸10min，后用无菌水冲洗2~3次。种子则先用10%次氯酸钠浸泡20~30min，难以消毒的可用0.1%升汞消毒5~10min。对于种皮太硬的种子，也可预先去掉种皮，再用4%次氯酸钠浸泡8~10min。
③花药的消毒
用于组织培养的花药多未成熟，其外面有花萼、花瓣或颖片保护，处于无菌状态。消毒时将整个花蕾或幼穗用70%酒精浸泡数秒钟，然后用无菌水冲洗2~3次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用无菌水冲洗2~3次。
④根及底下部器官的消毒
由于这类材料生长于土壤中，表面带菌量大，消毒较为困难。可先用自来水冲洗，软毛刷刷洗，用刀切去损伤及污染严重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸5~10min或2%次氯酸钠中浸10~15min，最后用无菌水冲洗3次。
在操作时要根据材料的大小、幼嫩、质地等差异做出判断后，再选择适宜的消毒剂种类、浓度和消毒时间，切不可生搬硬套。消毒的最佳效果应以最大限度地杀死材料上的微生物，而又对材料的损伤最小为好。