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网站首页如何通过组织培养方法脱去植物本身所带病毒，简述其原理
如何利用组织培养法进行大蒜脱毒？
（1）茎尖培养脱毒病毒在鳞茎中分布并不均匀。一般而言，植株内病毒数量随远离分生组织顶端部位而增加，顶端分生组织数量极少甚至无病毒。因此，采用茎尖分生组织，诱导形成愈伤组织，分化胚状体，可以获得无病毒植株。
①接种。剥去蒜皮，用自来水冲洗0.5小时左右，放入0.1%HgCl2消毒灭菌15分钟，用无菌水认真冲洗7次。在超净工作台解剖镜下，剥取大蒜茎尖0.2～0.5毫米，接种到培养基上，进行无菌茎尖培养。接种用茎尖越小，脱毒效果越好，但成苗率下降。
②培养条件。培养温度25℃1℃，光照强度2000～3000勒克斯，光照培养16小时，暗培养8小时。
③培养。将剥取的茎尖，放置在附加不同激素与浓度配比的培养基上增殖，增殖2～3代后可以转移到生根培养基上生根。适当调整培养基中无机盐成分，如Co2＋、Cu2＋、K＋和Ca2＋浓度，可促进茎尖分生组织的生长、分化；培养基种类和茎尖大小也会直接影响大蒜茎尖组培脱毒的效果。诱芽培养基以MS和B5最好，B5与适当浓度的6-BA和NAA配合能提高芽分化率和生根率，如B5+6-BA3毫克/升+NAA0.1毫克/升+Ade（腺嘌呤）30毫克/升+KT0.5毫克/升配制的培养基有利于大蒜茎尖形成多芽；1/2B5+NAA0.05毫克/升+6-BA0.01毫克/升+0.2%活性炭配方则可促进组培芽生根。
④移栽。将生根后的脱毒苗，分期分批移栽到已灭菌的装有灭菌蛭石的营养钵内。为防治蚜虫传染病毒，营养钵应放置在防虫网室。
⑤大蒜病毒检测。将剥离的大蒜茎尖置于培养基上培养2个月后，取部分愈伤组织或小苗，并将其捣碎，研磨，制成组织汁液，用磷酸盐作缓冲液在3000转/分钟离心20分钟，弃去残渣，取上清液，用2%磷钨酸（pH6.8）负染色1～2分钟，在电镜下观察，并以未脱毒样品做对照，确认所含病毒的基本形态和特征。（2）花序轴离体培养脱毒大蒜蒜薹上可形成许多气生鳞茎，表明花序轴顶端分生组织具有很强的腋芽萌发潜力。发育早期的花序轴，其繁殖系数高达76，是传统茎尖培养繁殖系数的25倍。花序轴离体培养操作简便，是一种高效培育大蒜脱毒种苗的技术。多数病毒均不能通过分生组织和种子传播，所以用花序轴离体培养可以获得脱毒苗。如以花序轴为外植体，所得到的试管苗，其大蒜花叶病毒脱毒率高达77.6%，脱毒效果高于只带1～2个叶原基的茎尖培养试管苗。花序轴培养需要较高的pH和较高浓度的生长素以及一定浓度的GA，花序轴培养的适宜条件为B5+NAA0.1毫克/升+6-BA 2毫克/升，pH6.5；继代培养条件为MS+6-BA2毫克/升+NAA0.1毫克/升+GA30.05毫克/升+蔗糖20克/升，pH6.2。（3）茎盘培养脱毒将带有茎盘的鳞茎基部切成立方体小块，放在70%的乙醇中消毒5分钟，去掉贮藏叶和营养叶，剩下约1厘米厚的茎盘，每个茎盘分成4份，接种到LS固体培养基上，置于25℃、3000勒克斯、光照16小时/天条件下培养。大约1周后茎盘外植体表面出现多个圆顶状结构，并长出愈伤组织，2周后分化出绿芽，3周后茎长至1厘米左右。培养基内添加的激素浓度和种类对离体茎分化有明显影响，不加激素时平均每个茎盘可分化15个芽，高于加激素的，NAA的抑制作用强于BA；当NAA浓度达到1毫克/升时，愈伤组织基本不能分化出绿苗；形态学观察表明，NAA促进愈伤组织的形成，而BA则促进鳞茎基部营养叶的伸长。低温预处理天数与形成的鳞茎数目成正比，作为外植体的茎盘须在4℃低温下处理至少4周，当处理时间达到8周以上时，1个鳞茎平均可分化出25个芽，其中95%的芽可以形成鳞茎，室温条件下则达不到此效果。茎盘培养结合4℃低温预处理8周，每个鳞茎可形成100个小鳞茎，普通的培养方法只能形成5～6个。与茎尖培养脱毒相比，茎盘培养法分化效率高，大约3周后外植体表面可直接分化出多个小鳞茎，鳞茎的分化不需加生长激素。（4）茎盘圆顶培养脱毒在茎盘培养的早期，茎盘的表面长出多个圆顶状结构，组织学观察表明，这种结构的内部细胞和形成过程均与大蒜鳞茎的茎尖培养相似。在相同的环境条件下，将分离的圆顶状结构接种到LS固体培养基上，同样能够分化出绿苗，长成完整的植株。因此，茎盘圆顶也可以用做脱毒的外植体。茎盘圆顶培养具有较高的繁殖效率，每个小鳞茎可产生15～20个无毒大蒜植www.rixia.cc株，而且维护无毒的有效期超过3年。
在组织培养中，采用茎尖培养为什么可以有效地脱去病毒呢？
so她的病毒浓度往往是最低的
一般用茎尖分生组织培养来进行脱毒
当然我们在实验室也可用根尖分生组织的
春满人间百花吐艳
福临小院四季常安
欢度春节
茎尖脱毒培养的原理是什么，植物组织培养
茎尖培养除去病毒的方法的原理是什么？
近几年来，采用茎尖培养法除去病毒，获得无病毒种苗，已经在很多国家被广泛采用，取得了良好的效果。除去病毒的花卉，具有质量好、产量高的优点。
所谓茎尖培养，也叫做茎顶培养、分生组织培养或生长点培养。早在1943年，White采用离体培养的方法成功地培养了被烟草花叶病毒（TMV）侵染的番茄根，发现根尖部分不存在病毒。以后很多人也发表了类似的文章。根据这些现象，Morel等人从感病的大丽花植株上切取茎尖培养，获得了去病毒植株，从而为拯救优良品种开辟了一条新的有效途径。至今已有几十种花卉植物采用茎尖培养法取得了成功。Hollings（1960）以香石竹为材料研究茎尖大小与脱去香石竹斑驳病毒的关系，结果发现，当茎尖大小为0.11mm时，脱毒率为66%；0.25mm时，脱毒率为40%；0.5mm时，为13%；0.75mm时，为11%；1.0mm时，则全部带毒。这说明，愈接近茎尖，病毒浓度愈低。病毒在植物体内的分布情况很不一致，其中以分生组织中含毒量最低，甚至完全不带病毒。因此，取一定大小的茎尖（一般为0.2～0.8mm长，带1～2个叶原基为好）进行茎尖培养，可获得脱毒种苗。
目前国际上已获得无病毒种苗，并在生产上大规模应用的花卉植物有大丽花、香石竹、菊花、兰花、矮牵牛、百合、小苍兰、鸢尾等几十种花卉。
1 无病毒种苗的生产流程
1.1 茎尖的切取与消毒
植物顶端分生组织的形态大小，依植物品种、生长期以及外界环境的影响而有变化。如百合的顶端为半球形，比较大，容易制取；香石竹的茎尖比较小，为对生叶，由十字交叉的叶原基交互发育而成，顶端分生组织的横切面呈椭圆形，有长短径之分，旁边为叶原基；矮牵牛的茎尖外形及大小与香石竹相似；大丽花的叶原日夏养花网基为对生，着生在分生组织附近，因此要切取不带叶原基的分生组织就比较困难；菊花的叶原基被密生的绒毛所缠绕，分生组织很小，比较难切割。因此，所谓茎尖，也就是指茎端最前面的分生组织以及由数个叶原基组成的部分。
取外表生长健康、品种优良的花卉植株作为茎尖培养的材料，摘取长度为2～3cm的顶芽或侧芽，最好是随采随处理。剥去外边叶片后，在自来水中用纱布轻轻擦洗3～4次，再在清水中冲洗多次，在滤纸上吸干后，在70%的酒精中浸0.5～1min，迅速转移到10%的漂白粉溶液（加入若干滴吐温-20）中处理10min，取出，于无菌水中漂洗40～5次。漂白粉中效果更好。取出材料，放在无菌培养皿中的滤纸上，待用。不同的植物材料采用不同的表面消毒剂，其浓度与消毒时间也常有变化。
茎尖培养要求技术熟练，开始时凭肉眼或借助扩大镜进行粗剥，除去茎外面的叶片，然后移到解剖镜下，将叶片层层剥离，或者沿茎的纵向，将茎表及叶片切开，使生长点暴露出来，然后切取带有1～2个或3～4个叶原基的茎尖，迅速转移到培养基上，切口向下。注意不能碰破茎尖。
1.2 培养基及培养条件
茎尖培养成败的关键在于寻找合适的培养基。茎尖培养基的成分与一般组培日夏养花网用培养基基本一致，包括大量元素、微量元素及有机成分。由这三类成分构成的培养基称为基础培养基。对多数植物来说，只靠基础培养基还不行，还须加入必要的生长调节物质，如赤霉素（GA）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、激动素（KT）、2，4-D和6-BA等。有些植物的茎尖培养还需加入天然复合物，如椰乳、酵母或麦芽糖提取液等。
目前采用的培养基有很多种。常用的种类有Murashigeskong（简称MS培养基）、White培养基、Eriksson（简称ER培养基）、Gamborg（简称B5培养基）、Shenk-Hildbrandt（简称SH培养基）、Heller（简称HE培养基）等。各类培养基都各具特色，尤其是MS及White培养基使用较为普遍。例如，香石竹茎尖培养，采用的是MS培养，培养温度为25℃，1000～1500lx、12～14h的光照，3～4d后茎尖转为绿色，25～40d后组培苗转绿，继代培养后，转移到1/2培养基上发根，获得完整植株。
1.3 茎尖培养成败因子
茎尖培养的目的是为获得无病毒优质种苗。成败的标准首先是茎尖苗是否成活、成苗。其次，成活的茎尖苗是否带有病毒，因为培育出仍然带有病毒的茎尖苗是毫无意义的。也就是说，茎尖培养的成功率包括茎尖苗的存活和脱毒率两个方面。
影响茎尖培养成败的因子是多方面的。除了上面所提到的培养基种类、无菌操作技术、培养条件等因素外，还必须注意以下几点：
第一，茎尖的大小。茎尖的大小与茎尖苗的成活率和脱毒率有相关性。所取茎尖越大，越易成苗，但脱毒率低；茎尖越小，脱毒率越高，但过小的茎尖难以成苗。因为叶原基的存在是茎尖成活的必要条件。一般采用带有1～2个或3～4个叶原基的茎尖比较合适，这样大小的茎尖既保证一定的成活率，又能使一定数量的茎尖苗不带有病毒。
第二，培养过程中可能出现的几种情况。在正常情况下，接种在培养基上的茎尖放在合适的培养条件下，由原来的白色或淡灰色转为绿色，茎尖增大，有时形成少量的愈伤组织。如香石竹茎尖培养大致经过1个月时间，形成绿色小茎及小叶，经过继代培养后转移到发根培养基上很快形成根系，成为完整植株。
接种的茎尖经过1～2周后仍不见明显变化，也无茎、叶分化，这可能是培养基中分裂素浓度低或分裂素与生长素二者比例QesCIr不合适，或者是培养温度偏低所致。
接种后如果茎尖增长过快，形成大量愈伤组织，但很少见到茎尖伸长，颜色也较淡，或呈透明状，时间一久就会死掉，这可能是由于激素浓度过高、光照不足或温度偏高所致。
第三，热处理与去病毒。利用某些病毒受热以后的不稳定性使病毒失去活性，从而获得无毒苗。这在花卉脱毒方面已经被广泛采用。不同花卉品种热处理时间及温度高低有所不同，一般是将盆栽植物在35～45℃的温度下持续培养一至数月。将这种高温下培育出来的侧芽用作茎尖培养材料，其脱毒率可以大大提高。
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