植物病毒及亚病毒的本质特征：病毒具有五大特点：①形体微小，缺乏细胞结构；②只含一种核酸，DNA或RNA；③依靠自身的核酸进行复制；④缺乏完整的酶系统；⑤严格的细胞内寄生。

病毒一般由核酸（DNA或RNA）和外壳蛋白构成。然而，1971年Dienner发现了仅含小分子量RNA，而不含外壳蛋白的类病毒，即裸露的RNA分子，能单独引起侵染和增殖复制。1981年在澳大利亚发现有的植物病毒除了含有基因组RNA外，还含有类似类病毒的环状RNA分子，还能与病毒基因组RNA共同包被于病毒粒子中，这种类似类病毒的环状RNA叫做拟病毒。1982年Prusiner发现羊搔痒病是由分子量约50kDa的蛋白质，称为蛋白侵染因子或朊病毒。类病毒、拟病毒和朊病毒的发现极大地丰富了病毒学的内容。通常把具有蛋白外壳，内部具有核酸链的完整病毒称为真病毒，而把类病毒、拟病毒和朊病毒列为亚病毒。

按寄主划分，病毒可分为动物病毒、植物病毒、细菌病毒（噬菌体）、真菌病毒和亚病毒。植物病毒作为一种病原，能引起不少植物病害。据1985年统计，有600种病毒引起植物病害。在这些病害中，能侵染园艺植物的就占很大一部分。其中不少是毁灭性的病害或对植物的生长和发育造成严重影响的病害。如椰子死亡类病毒，在40年间毁坏了3000多万株椰子树，而且每年继续损失大约50万株椰子树。再如，我国的唐菖蒲，从南到北都感染病毒病，发病率高达60%～70%，造成品质、产量严重下降，无法进入国际市场。但是，植物病毒也有可利用的价值，特别在开发基因工程载体、转基因植物研究等方面，发挥了很大的作用。

植物病毒：烟草花叶病毒、郁金香碎色花病毒、大蒜E病毒等。

植物病害的种类很多，根据病原的种类可分为两大类，

一是非侵染性病害包括由非生物引起，例如营养元素的缺乏，水分的不足或过量，低温的冻害和高温的灼病，肥料、农药使用不合理，或废水、废气造成的药害、毒害等；

另一类是侵染性病害，包括由生物引起，有传染性，病原体多种，如真菌、细菌、病毒、线虫或寄生性种子植物等。

扩展资料

由植物病毒寄生引起的病害。植物病毒必须在寄主细胞内营寄生生活，专化性强，某一种病毒只能侵染某一种或某些植物。但也有少数为害广泛；如烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒。

一般植物病毒只有在寄主活体内才具有活性；仅少数植物病毒可在病株残体中保持活性几天、几个月、甚至几年，也有少数植物病毒可在昆虫活体内存活或增殖。

植物病毒在寄主细胞中进行核酸（RNA或DNA）和蛋白质外壳的复制，组成新的病毒粒体。植物病毒粒体或病毒核酸在植物细胞间转移速度很慢，而在维管束中则可随植物的营养流动方向而迅速转移，使植物周身发病。

病毒除夺取受侵染植物的一部分营养外，主要是可改变寄主植物的正常代谢过程，干扰或破坏其呼吸作用、光合作用、酶的活性，以及生长素和其他激素的代谢等。

参考资料来源：百度百科-植物病毒

一、控制变量法：通过固定某几个因素转化为多个单因素影响某一量大小的问题.

二、等效法：将一个物理量,一种物理装置或一个物理状态（过程）,用另一个相应量来替代,得到同样的结论的方法.

三、模型法：以理想化的办法再现原型的本质联系和内在特性的一种简化模型.

四、转换法（间接推断法）把不能观察到的效应（现象）通过自身的积累成为可观测的宏观物或宏观效应.

五、类比法：根据两个对象之间在某些方面的相似或相同,把其中某一对象的有关知识、结论推移到另一个对象中去的一种逻辑方法.

六、比较法：找出研究对象之间的相同点或相异点的一种逻辑方法.

七、归纳法：从一系列个别现象的判断概括出一般性判断的逻辑的方法.

扩展资料：

物理学的本质：物理学并不研究自然界现象的机制（或者根本不能研究），我们只能在某些现象中感受自然界的规则，并试图以这些规则来解释自然界所发生任何的事情。我们有限的智力总试图在理解自然，并试图改变自然，这是物理学，甚至是所有自然科学共同追求的目标。

六大性质

1.真理性：物理学的理论和实验揭示了自然界的奥秘，反映出物质运动的客观规律。

2.和谐统一性：神秘的太空中天体的运动，在开普勒三定律的描绘下，显出多么的和谐有序。物理学上的几次大统一，也显示出美的感觉。

牛顿用三大定律和万有引力定律把天上和地上所有宏观物体统一了。麦克斯韦电磁理论的建立，又使电和磁实现了统一。爱因斯坦质能方程又把质量和能量建立了统一。光的波粒二象性理论把粒子性、波动性实现了统一。爱因斯坦的相对论又把时间、空间统一了。

3.简洁性：物理规律的数学语言，体现了物理的简洁明快性。如：牛顿第二定律，爱因斯坦的质能方程，法拉第电磁感应定律。

4.对称性：对称一般指物体形状的对称性，深层次的对称表现为事物发展变化或客观规律的对称性。如：物理学中各种晶体的空间www.rixia.cc点阵结构具有高度的对称性。竖直上抛运动、简谐运动、波动镜像对称、磁电对称、作用力与反作用力对称、正粒子和反粒子、正物质和反物质、正电和负电等。

5.预测性：正确的物理理论，不仅能解释当时已发现的物理现象，更能预测当时无法探测到的物理现象。例如麦克斯韦电磁理论预测电磁波存在，卢瑟福预言中子的存在，菲涅尔的衍射理论预言圆盘衍射中央有泊松亮斑，狄拉克预言电子的存在。

6.精巧性：物理实验具有精巧性，设计方法的巧妙，使得物理现象更加明显。

对于物理学理论和实验来说，物理量的定义和测量的假设选择，理论的数学展开，理论与实验的比较是与实验定律一致，是物理学理论的唯一目标。

人们能通过这样的结合解决问题，就是预言指导科学实践这不是大唯物主义思想，其实是物理学理论的目的和结构。

在不断反思形而上学而产生的非经验主义的客观原理的基础上，物理学理论可以用它自身的科学术语来判断。而不用依赖于它们可能从属于哲学学派的主张。在着手描述的物理性质中选择简单的性质，其它性质则是群聚的想象和组合。

通过恰当的测量方法和数学技巧从而进一步认知事物的本来性质。实验选择后的数量存在某种对应关系。一种关系可以有多数实验与其对应，但一个实验不http://www.rixia.cc能对应多种关系。也就是说，一个规律可以体现在多个实验中，但多个实验不一定只反映一个规律。

参考资料：百度百科——物理学

1 RT-PCR技术

RT-PCR是英文Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction的简写，中文称之为反转录聚合酶链式扩增反应。在反转录酶M-MLV或AMV的作用下，以RNA为模板、以20个左右的核苷酸为引物，反转录合成cDNA。再以cDNA为模板，两个3和5端互补寡核苷酸引物，由Taq聚合酶从5→3进行一系列DNA聚合反应，扩增出所需要的目的DNA，可将极微量的靶DNA特异性地扩增上百万倍，从而大大提高了对DNA分子的分析和检测能力。

利用PCR技术，可以检测到单分子核酸或对每10万个细胞中仅含1个靶核酸分子的样品。因此，该技术创立至今十年来，迅速地形成为常规的标准程序，为生物科学提供了从微量微生物材料中快速得到大量特定的遗传物质的实验手段。PCR在植物病毒的检测、鉴定和植物病毒的检疫工作中也将具有重要意义。如果病毒核酸是DNA类型，不需要反转录（RT），直接可以进行聚合酶链式扩增（PCwww.rixia.ccR）。而大多数植物病毒的核酸类型为RNA，因此，需要先进行反转录（RT），再进聚合酶链式（PCR）扩增。用1%琼脂糖和5%聚丙烯酰胺进行电泳，即可检出扩增片段。

这日夏养花网里以香石竹斑驳病毒为例，介绍RT-PCR检测香石竹斑驳病毒的实验技术。

用已知病毒核酸保守序列设计引物，分别提取病、健植物总RNA为模板，进行RT-PCR反应，琼脂糖或PAGE电泳检测扩增结果。感病材料会出现特异扩增带。如香石竹斑驳病毒（Carnation mottle virus，CarMV）。根据该病毒的RNA序列设计引物，P1引物（5′端引物，与CarMV RNA的2516～2538同源）：5′-〔TTA，GTT，TGC，CCC，CGT，TGG，TAA，CC〕-3′。P2引物（3′端互补引物，与CarMV RNA的3100～3124对应）：5′-〔AAG，CGT，CAT，CGT，TGA，ATC，CCA，GAG〕-3′。目标片段大小为608nt。对病健材料进行了RT-PCR，从感病材料中可以扩增出了大约600bp的特异片段，而健康植物无此扩增带。用此方法可以快速、准确地检测香石竹斑驳病毒。操作如下：

（1）RNA提取

分别取感病及健康叶片0.2～0.5g，加液氮研成粉末，按1g∶2ml的比例悬浮于RNA抽提缓冲液（20mmol/L Tris-HC1 pH8.0，1mmol/L EDTA，1%SDS，0.2%巯基乙醇）。按1∶1比例加入水饱和苯酸—氯仿—异戊醇（25∶24∶1）混合液，抽提数次，乙醇沉淀总RNA。溶入20～50l TE缓冲液中，-70℃冰箱保存备用。

（2）cDNA合成反应体系组分为

待检测材料总RNA或健康材料总RNA各0.5/g，20pmol/L引物P21l，5MMLV缓冲液4l，ddH2O7l，该混合液于88℃处理10min后冰上迅速冷却，然后加入10mmol/L dNTPs 1l，40U/l Rnasin 0.5l，100mmol/L DTT 2l，200U/l MMLV逆转录酶1l，混合后经42℃处理lh，合成cDNA。

（3）PCR扩增

取上述的cDNA各0.5g，分别加入10PCR缓冲液5l，20pmol/L引物P1和引物P2各1ZWPQRVWwl，10mmol/LdNTPs 1l，88℃10min之内加2U/l Taq DNA聚合酶1l，加ddH2O至50/l。然后在液面上加三滴石蜡油，进行如下PCR热循环：94℃3min，60℃1min，72℃1min，1次循环；94℃40s、60℃1min，72℃1min，35次循环，最后72℃延伸10min。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检查。携带CarMV的样品会出现600bp的特性扩增带。如图1。

图1 CarMV PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果

1.提纯病毒材料PCR扩增 2.感病组织PCR产物 3.健康组织PCR产物 4.分子量标准

RT-PCR技术是检测植物病毒中灵敏度最高的方法之一。其灵敏度比ELISA高100～1000倍。比核酸分子杂交高10～100倍。目前已有PVY、CMV、CarMV、TAV、CVB、ToRSV、TRSV、PNRSV等花卉病毒的特异引物和成熟的RT-PCR技术。

2 核酸分子杂交

核酸分子杂交是基于植物病毒的RNA或DNA链之间的碱基配对的基本原理。当双链DNA分子加热时，链间的氢键被破坏，两条链分开，变性分开的单链冷却时，碱基的氢键重新形成，双链复原。在变性分开的RNA或DNA单链上加上同位素或非同位素标记，做成探针，和待检测样品的RNA或DNA进行碱基特异性配对而形成稳定双链分子，通过检测同位素的放射性和非同位素的显色或荧光来检测样品的RNA或DNA是否与探针发生杂交反应。根据已知病毒核酸序列设计引物，用标准阳性材料，即已分离、鉴定的某种病毒材料，提取总RNA，用反转录酶反转录形成cDNA，用同位素或非同位素标记此cDNA，制备成探针，与待测样品进行分子杂交。如果能杂交，出现阳性，说明待测样品含有已鉴定的该病毒。该方法能快速、高效地检测植物携带病毒的情况。

用于检测的杂交有斑点杂交和核酸吸印转移杂交。斑点杂交是将待测样品的DNA或RNA和汁液点于硝酸纤维素膜上，经干燥后，与同位素或非同位素标记的探针发生杂交反应，以检测样品中是否存在待测病毒。斑点杂交是一种快速、简便、经济的快速检测和鉴定病毒的方法。核酸吸印转移杂交需要先将待测样品的DNA或RNA经限制性内切酶切为大小不等的片段，电泳后，从凝胶中转移到硝酸纤维素膜上，经干燥后，再与同位素或非同位素标记的探针发生杂交反应，以检测样品中是否存在待测病毒。

核酸分子杂交灵敏度不如RT-PCR高，但此技术不受病毒不同株系的影响，无株系专化性。

不同实验方法测定植物病毒具有不同灵敏度（表1），可以根据需要选用。

表1 不同实验方法测定植物病毒的灵敏度比较