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SDS-PAGE和凝胶层析两种测蛋白分子量地方法有何不同

2022-07-16 08:38:40 分类:养花问答 来源: 日夏养花网 作者: 网络整理 阅读:163

分子筛层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳皆可用于测定蛋白质分子量,其原理有何差异?各自特点和适用范围

分子筛层析,又称凝胶层析、排阻凝胶层析、凝胶过滤,利用凝胶把物质按分子大小不同进行分离的 一种方法。由于被http://www.rixia.cc分离物质的分子大小(直径)和形状不同,洗脱时,大分子物质由于直径大于凝 胶网孔而不能进入凝胶内部,只能沿着凝胶颗粒间的孔隙,随溶剂向下移动,因此流程短,首先流 出层析柱,而小分子物质,由于直径小于凝胶网孔,能自由进入胶粒网孔,使之洗脱时流程增长, 移动速度变慢而后流出层析柱。 可用于测定氨基酸,脱盐和浓缩,分离提纯生物大分子,除去热源物质 SDS-PAGE,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理是当SDS 与蛋白质结合后,蛋白质分子即带有大量的负 电荷,并远远超过了其原来的电荷,从而使天然蛋白质分子间的电荷差别就降低乃至消除了,与此 同时蛋白质在 SDS 作用下结构变得松散,形状趋向一致,所以各种 SDS-蛋白质复合物在电泳时产生的脉动率差异,就反映了分子量的大小。 可用于测PH 值和蛋白质的亚基数。

SDS-PAGE和分子筛过滤层析测定蛋白质分子量在原理和方法上有何不同。http://www.rixia.cc

SDS-PAGE和分子筛过滤层析测定蛋白质分子量在原理和方法上有何不同。

sds分离靠的是在电场中蛋白质分子跟page的结合后的分子量大小从而在凝胶中跑的速度不同而分开的。

分子筛是根据不同分子量的分子大小不同,从而进行蛋白质分离,达到测量分子量的目的的。


SDS-PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳,作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。

作用原理:聚丙烯酰胺凝胶日夏养花网为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。

而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂(SDS即十二烷基硫酸钠)后,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小(可以忽略电荷因素)。

sds分离靠的是在电场中蛋白质分子跟page的结合后的分子量大小从而在凝胶中跑的速度不同而分开的,分子筛是根据不同分子量的分子大小不同,从而进行蛋白质分离,达到测量分子量的目的的
都是根据分子大小分离,但方法上一个是电泳,一个是层析。分子筛的原理是分子小的走的路程远,出来晚;PAGE则是分子大的阻力大,跑得慢。最后结果正好相反。
一个是电泳,一个是过滤。

sds聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量是什么?

如下:

SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键,并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷,掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。

聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N,N’—亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂作用下,聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。 

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带,如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质,蛋白质样品电泳后,就应只分离出一条区带。

用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量,为什么有时和凝胶层析法所得结果有所不同?

两种方法原理不同,有差异是正常的。如果差距较大,要仔细分析。一般凝胶层析是非变性的,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的,二硫键也被还原,所以是亚基(肽链)分子量。

凝胶层析与分子形状有关,一般marker都是球状蛋白,所以测球状蛋白分子量较准。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与分子形状无关。有些蛋白性质特殊,不适于用SDS-凝胶电泳法测定。比如结构特殊的,如胶原;带很多电荷的,如组蛋白;带有较大辅基的,如糖蛋白。

常规PAGE和SDS PAGE电泳有何异同?

从原理等分析,考试要考的,拜托大家了

SDS是一种阴离子除垢剂,可以在不打开二硫键的情况下分离寡聚蛋白的不同亚基。如果你想让二硫键打开,你必须用2-巯基乙醇或过氧酸来处理它。

原理:

1.聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(后来称为单体)在水溶液中聚合而成的亲水性聚合物。是一种透明不溶于水的韧性凝胶。

2.制备凝胶所需的原料有:丙烯酰胺、亚甲基双丙烯酰胺(双体,用作交联剂)O在水溶液中与催化剂引发聚合。

常用的催化剂是二甲氨基丙腈(DMAPN)、过硫酸铵、四甲基二胺、过硫酸铵或核黄素,然后用紫外光(www.rixia.cc波长253.7纳米)引发聚合。

扩展资料

PAGE是生化聚丙烯酰胺凝胶电泳,用于分离不同分子量的物质。主要目的是利用凝胶的密度差来达到分离非物质的目的。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺在促进剂中制成的。

聚丙烯酰胺凝胶电泳是在四甲基乙二胺和催化剂过硫酸铵(NH4)2S2O8(AP)或核黄素的作用下,在凝胶作用下聚合交联成三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶电泳。

参考资料来源:百度百科-page

SDS是一种阴离子去垢剂,能让寡聚体蛋白中不同的亚基分离,而不能使二硫键打开。如果想让二硫键打开,必须要用2-巯基乙醇或过氧酸来处理。

原理:

1、聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(以后简称单体)在水溶液中聚合而成的亲水性高聚物,是一种透明而不溶于水并有韧性的凝胶。

2、制备凝胶时需要的原料是:丙烯酰胺,亚甲基双丙烯酰胺(双体,用作交联剂)o在水溶液中用催化剂引发聚合。常用的催化剂有:二甲氨基丙腈(DMAPN);过硫酸铵,四甲基乙二胺;过硫酸铵或加核黄素后用紫外光(波长 253.7毫微米)引发聚合。

扩展资料:

PAGE在生化中为聚丙烯酰胺凝胶电泳,是用来分离分子量大小不一样的物质,主要是利用就是用凝胶的密度差来达到分离不物质的目的,聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide,简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂。

四甲基乙二胺和催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O8,简称AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。

参考资料来源:百度百科-page

SDS是一种阴离子除垢剂,可以在不开二硫键的情况下分离寡聚蛋白的不同亚基。如果想让二硫键打开,必须用2-巯基乙醇或过氧酸来处理它。

去脂能力很强的表面活性剂,因此常被应用在洗面奶中,因过强的清洁能力和高刺激性长期使用会严重降低皮肤防御能力,导致表皮细胞发育不成熟,结构松散,令表皮层变薄易受外界刺激且角质异化,引发脆弱敏感、毛孔粗大、肤色暗沉、痘痘滋生、衰老等一系列问题!

扩展资料:

作用:

十二烷基硫酸钠具有良好的乳化性 、 起泡性 、 水溶性 、 可生物降解、 耐碱 、 耐硬水, 并且在较宽 pH 值的水溶液中的稳定性和易于合成 、 价格低廉等特点 。

一直被广泛地应用于化妆品、 洗涤剂、 纺织 、 造纸、润滑以及制药、建材、化工、采油等工业 , 还可应用于正负离子表面活性剂复配体系的性质 、 胶团催化 、 分子有序组合体等基础研究方面 。

【用途一】用作洗涤剂和纺织助剂,也用作牙膏起泡剂、矿井灭火剂、乳液聚合乳化剂、羊毛净洗剂等。

【用途二】用作阴离子型表面活化剂、乳化剂及发泡剂。

【用途三】GB 2760-96规定为食品工业用加工助剂。发泡剂;乳化剂;阴离子型表面活性剂。用于蛋糕、饮料、蛋白、鲜果、果汁饮料、食用油等。

参考资料来源:百度百科-十二烷基硫酸钠



SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠), SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的日夏养花网标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

比较SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶层析法分离蛋白质的异同点

两种方法原理不同,有差异是正常的。如果差距较大,要仔细分析。
一般凝胶层析是非变性的,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的,二硫键也被还原,所以是亚基(肽链)分子量。
凝胶层析与分子形状有关,一般marker都是球状蛋白,所以测球状蛋白分子量较准。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与分子形状无关。
有些蛋白性质特殊,不适于用SDS-凝胶电泳法测定。比如结构特殊的,如胶原;带很多电荷的,如组蛋白;带有较大辅基的,如糖蛋白。
首先两者都能分离不同分子量的蛋白质,依据的原理是相同的,都是分子量不同,在电场中迁移速率不同,有快有慢;但SDS—聚丙烯酰胺电泳是首先将蛋白质分子破坏,将其分解成几条亚基,然后进行跑电泳分离,而凝胶则对蛋白质没有变性的作用,还有几点楼上已经说的很详细了

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本文标题: SDS-PAGE和凝胶层析两种测蛋白分子量地方法有何不同
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