蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而消除了蛋白质原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量，而与蛋白质所带的电荷无关，在一定条件下，蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
操作步骤
1、凝胶制备：
用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶）,垂直放置.将配制好的分离胶溶液倒入,滴加入无离子水,待凝胶聚集后,倒出无离子水,用吸水纸吸干,倒入浓缩胶,再插入梳子.
2、上样：
分别取样品若干ml于离心管中,按1/1～1/5比例加入5样品缓冲液,再沸水浴中加热3～5min,取出待用.用微量注射器分别吸取不超过30l不同浓度的标准蛋白样品和试验样品注入样品槽.点样结束后,调节电泳仪电流到10mA（2～3mA/em）,保持电流稳定不变,当溴酚蓝迁移到离分离胶底1～2cm时,即可停止电泳.
3、染色：
电泳完毕后,取出凝胶板,浸入染色液中,在37℃温箱中保温过夜.倒掉染色液,24h后,即可看到清晰的蛋白质条带.

你不是自己说了很多了吗。在我的理解，本来蛋白质的分子量就很大，不可能测量得很精确，因为使用的标尺也是一些标准蛋白质制成的marker（ladder）。你所引用的不是就有“大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷”吗，1g蛋白质对应一定的负电荷，然后复合物电荷数目不同电泳迁移率不同，跟标准蛋白一比较，就测出蛋白质分子量了

sds-page判定蛋白质的纯度:若该蛋白质是单肽链蛋白质，则电泳得到的只有一条蛋白带（两条色带：一条为溴酚蓝，一条为蛋白带）；若得出多条电泳带，则应该用非sds－page进行电泳，得出单一蛋白带则为单一蛋白质
sds-page判定蛋白质http://www.rixia.cc的分子量：
定义：r＝de/do
r为迁移率，de为蛋白质电泳迁移距离，do为溴酚蓝电泳迁移距离
则lgm=a-br
m为蛋白质分子量，a、b为常熟，a、b可由标准蛋白质（已知分子量的蛋白质）的迁移率算出。
若蛋白质为单肽链蛋白质，则m为其分子量；若蛋白质为多肽链蛋白质，则其分子量为各m之和

凝胶色谱柱和SDS本质不同。
一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出。至于多小的分子才能被凝胶颗粒阻碍是和分子筛的孔径有关。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，于连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电日夏养花网场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。
　　此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。

我觉得是和分子筛的孔径大小有关~~~ SDS-PAGE的孔http://www.rixia.cc径较大~~ 所以不管是什么分子量的都经孔径走~~ 所以最后大的蛋白被滞留在后面~~~ 而凝胶色谱的孔径较小~~~ 质量大的蛋白不经过孔径走而是从孔径的间隙走 日夏养花网 路径就短了很多~~~ 所以大的先出来~~~
不知道是不是这么回事~~~~~~

配制sds-page凝胶需要注意凝胶制备的过程很简单，但是凝胶一定要均匀无气泡，取出梳子的时候一定要小心，放置将胶孔戳破。

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SDS-PAGE凝胶的制备过程：
1、 按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。
2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角。
3、 按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。
4、 加入TEMED后，立即混匀，缓缓倒入两玻璃板间的胶床中，直到液体接近溢出时为止。
5、 立即插入适当的梳子，密切注意防止梳齿下产生气泡，用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上，然后将玻璃板斜靠在物体上，使成10角，可减少液体泄漏的机会。
6、 室温聚合一小时后，将玻璃板插入电泳槽中，上紧，倒入0.1XTBE缓冲液。
7、 小心取出梳子，加样。
How to Make an SDS-page gel
Alright so here’s a quick video on how to cast an SDS-PAGE gel. Although recipes can vary, the ingredients shown here are almost always used. Remember: always add TEMED last, and pour into plates immediately after!
Already know how to make a gel, but have problems with leaky gels? Check out our other video on How to Avoid a Leaky SDS-PAGE gel.
Okay now that you know how to make it, check out this video on How to Run an SDS-PAGE gel.