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在DNA分子提取过程中, SDS、蛋白酶K、氯仿各起什么作用?

2022-06-16 15:19:45 分类:养花问答 来源: 日夏养花网 作者: 网络整理 阅读:165

提取DNA时加入柠檬酸钠、SDS、氯仿、异戊醇和固体氯化钠的目的分别是什么

酚:氯仿:的目的是沉淀蛋白质原理如下:
酞与氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液日夏养花网与酚或氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性过离心,变性蛋白质的密度比水的密度为大,因而与分离,沉淀在水相下面,从而与溶解在水相中的DNA分开.
水相异戊醇的目的是减少抽提过程中的泡沫产生,原理如下:
在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合液内易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用.加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生

DNA提取过程中各试剂的作用?

需要各个试剂的详细作用,谢谢
去污剂(SDS,CTAB)使蛋白质变性,和DNA分离.
EDTA是DNA酶的抑制剂,防止细胞破碎后DNA被降解.
Tris/HCL是作为缓冲的,DNA在这一体系中呈稳定态;
PVP、抗坏血酸钠用来防止氧化,氯仿、异戊醇是去除蛋白,
酒精是沉淀DNA,因为DNA容易水,不溶于酒精。
去污剂(SDS,CTAB)是用来裂解细胞的,EDTA,Tris是作为缓冲的,使溶液pH不会变化太大;PVP、抗坏血酸钠用来防止氧化,氯仿、异戊醇是去除蛋白,酒精是沉淀DNA,因为DNA容易水,不溶于酒精。RNase当然是出去RNA。
注意:
去污剂不是用来裂解细胞的,裂解细胞一般用液氮
去污剂用来提高纯度,除去杂质的

DNA提取常规溶液中,浸泡www.rixia.cc缓冲液,STE缓冲液,TE缓冲液,蛋白酶K,EDTA,SDS的作用

还可以简单的说说DNA提取内容不
你用的试剂盒吗?
缓冲是调ph的,蛋白酶分解蛋白,EDTA是螯合二价离子,失活DNA酶,SDS是裂解细胞,变性蛋白用的,TE缓冲和STE缓冲大概是试剂盒里面的,改变DNA与硅胶亲和力的。这个名字不同的试剂盒是不同的,TAKARA的就是SE,WE之类的。
提DNA的资料:
质粒的话: http://wenku.baidu.com/view/68c2161ca300a6c30c229faf.html
全基因组的话: http://zhidao.baidu.com/question/4135413.html
试剂盒的话: http://zhidao.baidu.com/question/89052270.html?si=2

现在的分子生物学基本上是用试剂盒的,当然提全基因组做文库的还是碱裂法啊,浓盐法之类的大量提取。

实验动物肝脏中dna的提取中sds有什么作用

DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液www.rixia.cc除去RNBKcBidvP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.

(2).阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.

(3).苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇http://www.rixia.cc沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .

( 4).水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

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