单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique) 1975英科家日夏养花网MilsteinKohler所发明并获1984诺贝尔医奖 1984 德G. J. F.Kohler、阿根廷C. Milstein[3]丹麦科家N. K. Jerne由于发展单克隆抗体技术完善极微量蛋白质检测技术享诺贝尔理医奖 其原理: B淋巴细胞能够产抗体 体外能进行限裂; 瘤细胞虽体外进行限传代 能产抗体两种细胞融合杂交瘤细胞具两种亲本细胞特性免疫反应类疾病具抵抗力重要素物体受抗原刺激产抗体抗体特异性取决于抗原决定簇各种抗原具抗原决定簇免疫物所产抗体实种抗体混合物用种传统制备抗体效率低、产量限且物抗体注入体产严重敏反应外要些同抗体极困难近单克隆抗体技术现免疫领域重突破

现代单抗药物的产业的发展，伴随着细胞培养表达量的提高，带来后期纯化的压力不断增加，如何在下游工艺开发的早期能关注的到整个生产工艺的需求，理解提高亲和步骤的日夏养花网生产效率的含义，从哪些方面考虑亲和填料的筛选从而得到最佳的性价比生产投入？面对中试放大后更加复杂的料液，如何开发出更稳定的精细纯化工艺，在满足高分辨率同时维持高的动态载量。如何用DoE等工具来优化这些步骤，寻找工艺空间，快速拿到最优的工艺参数。

单抗的用途：
单克隆抗体具有高度特异性、高纯度特点，使其在很大浓度范围内获得低背景，所以在组织免疫染色中特别有用，但是大多数单抗在深固定的组织中不能很好的与抗原反应。还可以应用于免疫沉淀，免疫印迹技术，虽然都具有特异性高，背景低的有点，但都存在很明显的缺点，比如亲和力低，可能出现日夏养花网交叉反应等等，所以在应用时需要慎重。另外单抗还可以用来进行免疫亲和纯化抗原；对单克隆抗体进行标记还可以用做快速诊断以及疫苗的研究等等。

一般用来免疫的蛋白都并不一定要具有生物活性，关键是要具有免疫原性也就是抗原性。既变性的蛋白，只要保持抗原性，也可作为抗原用来注射产生抗体，也就可以做单抗。一般来说，如果免疫原和抗原纯度高比较好，就可以获得较多的分泌特异性抗体的目的杂交瘤（但实际很难做到）。
若用于蛋白的细胞定位等，在筛选和鉴定单抗时应注意，用于筛选鉴定的抗原纯度应比免疫原纯度高。

常规免疫方案：
一般初次基础免疫每只小鼠10～100微克抗原加福氏完全佐剂，注射于小鼠的颈背部皮下（多点）或腹腔内，
二次基础免疫取同量抗原+福氏不完全佐剂注射小鼠的颈背部皮下（多点）或腹腔内，
加强免疫取同量抗原不加佐剂静脉、腹腔注射或脾内注射。基础免疫最好同时免疫几只小鼠。
脾内免疫方案：时间短，抗原用量少（2～10微克可溶性抗原）
体外免疫方案：只需要0.5～5微克/ml脾细胞培养液。
注意：抗原用量少的方案，免疫效果也随之降低。

单克隆抗体的纯化现在有很多种方法，主要还是要根据你后面实验的需要选择合适的纯化方法！目前用的比较多的是辛酸-硫酸铵沉淀法！该方法较硫酸铵沉淀法来讲，纯化的效果更好并且单抗纯化后的效价不会受很大的影响，操作也相当简便！如果你不需要很纯的单抗的话，建议考虑用此纯化方法！另外亲和层析TICogYH法也叫常用，一般通过过亲和层析柱，其优点是该方法操作更简便快速，但其需要购买柱子，www.rixia.cc且价格比较昂贵，同时现在的柱子一般一般只能纯化IgG，对IgG的吸附率为90%～98%，IgM为2%～30%，IgA为1.5%～20%。故只有当你的单克隆抗体亚类为IgG时才能通过过柱层析。此方法纯化后的单抗纯度很高，基本没有杂蛋白，但其目的蛋白损失也较大。其中还有其它的纯化方法，可去查文献了解！！

采用辛酸硫酸铵法粗体，然后过层析柱即可。

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